RTP1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-433714-ACT

Das Mausgen **Rtp1** kodiert das Rezeptor-Transportprotein 1 (RTP1), einen membranassoziierten akzessorischen Faktor, der die Verarbeitung im endoplasmatischen Retikulum, den Transport und die funktionelle Oberflächenexpression von Duftrezeptoren in olfaktorischen Sinnesneuronen fördert. Indem RTP1 die Rezeptorreifung und den Export über den sekretorischen Weg erleichtert, beeinflusst es die Signalkompetenz von GPCRs sowie die durch Gerüche ausgelöste sensorische Transduktion. Die **Rtp1**-Expression ist eng an neuronale Differenzierungsprogramme im Riechepithel gekoppelt und kann die Funktionalität des Rezeptorrepertoires an der Zelloberfläche prägen. Eine Fehlregulation der Rezeptor-Transportmaschinerie wie RTP1 ist relevant für Studien zu sensorischen Funktionsstörungen, neuronalen Stressantworten und der GPCR-Biogenese in der Neurobiologie.

RTP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Rtp1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RTP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Rtp1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Rtp1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RTP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Rtp1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RTP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RTP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Rtp1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.