RTP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-433714-ACT

O gene Rtp1 de camundongo codifica a proteína transportadora de receptores 1 (RTP1), um fator acessório associado à membrana que promove o processamento no retículo endoplasmático, o tráfego e a expressão funcional na superfície celular de receptores odorantes em neurônios sensoriais olfatórios. Ao facilitar a maturação dos receptores e sua exportação pela via secretória, a RTP1 influencia a competência de sinalização de GPCRs e a transdução sensorial evocada por odores. A expressão de Rtp1 está intimamente ligada a programas de diferenciação neuronal no epitélio olfatório e pode moldar a funcionalidade do repertório de receptores na superfície celular. A desregulação da maquinaria de tráfego de receptores, como a RTP1, é relevante para estudos de disfunção sensorial, respostas neuronais ao estresse e biogênese de GPCRs em neurobiologia.

RTP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Rtp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RTP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Rtp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Rtp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RTP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Rtp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RTP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RTP1 em células tumorais com expressão de Rtp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.