Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) RPA194: sc-400816-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)RPA194 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RPA194 (h) y el plásmido de doble nickasa RPA194 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a POLR1A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RPA194 Anticuerpo (C-1): sc-48385
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) RPA194 | sc-400816-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) RPA194 | sc-400816-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
POLR1A codifica RPA194, la subunidad catalítica de la ARN polimerasa I que impulsa la síntesis de pre-ARNr 47S en el nucléolo, un paso limitante de la velocidad en la biogénesis de ribosomas. RPA194 actúa dentro de la maquinaria de transcripción de la Pol I para sostener la organización nucleolar, el crecimiento celular y la coordinación del procesamiento del ARN ribosomal con el estado metabólico celular. La alteración de la transcripción de ARNr dependiente de POLR1A modifica la señalización de estrés nucleolar y las respuestas posteriores asociadas a p53, vinculando esta vía con el control del ciclo celular y la vigilancia del genoma. La variación genética y la desregulación de la actividad de la Pol I se han asociado con fenotipos relacionados con ribosomopatías y se estudian ampliamente en el contexto de la biología proliferativa y la adaptación al estrés.
RPA194 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus POLR1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de POLR1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de POLR1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con POLR1A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.