Rock-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400367

概要

ROCK1は、Rho関連コイルドコイル含有プロテインキナーゼ1（Rock-1）をコードしており、RhoAの主要なエフェクターとして機能するセリン／スレオニンキナーゼで、アクトミオシン収縮性と細胞骨格の再構築を制御します。Rock-1は、ストレスファイバー形成、接着斑（フォーカルアドヒージョン）の動態、ミオシン軽鎖活性を制御する主要基質をリン酸化し、Rho/ROCKシグナルを細胞形態、運動性、接着、細胞質分裂に結び付けます。これらの過程を通じてROCK1はメカノトランスダクションと組織構築に寄与し、その制御異常は、疾患生物学における浸潤能の変化や、血管・線維化応答の異常と関連づけられてきました。さらにROCK1は、アポトーシスや炎症性シグナルの文脈でも関与が示されており、多様な細胞モデルにおける経路間クロストークを解析するうえで重要な結節点となります。

Rock-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるROCK1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ROCK1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ROCK1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rock-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rock-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ROCK1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rock-1の機能に不可欠なROCK1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ROCK1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rock-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRock-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ROCK1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rock-1 HDRプラスミド（h）および Rock-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはROCK1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のROCK1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。