Rock-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400367

Übersicht

ROCK1 kodiert die Rho-assoziierte, coiled-coil-haltige Proteinkinase 1 (Rock-1), eine Serin/Threonin-Kinase, die als zentraler Effektor von RhoA fungiert und die Aktomyosin-Kontraktilität sowie den Umbau des Zytoskeletts reguliert. Rock-1 phosphoryliert wichtige Substrate, die die Bildung von Stressfasern, die Dynamik fokaler Adhäsionen und die Aktivität der Myosin-Leichtkette steuern, und verknüpft damit die Rho/ROCK-Signalgebung mit Zellform, Motilität, Adhäsion und Zytokinese. Über diese Prozesse trägt ROCK1 zur Mechanotransduktion und zur Gewebearchitektur bei; eine Dysregulation wurde in der Krankheitsbiologie mit verändertem invasivem Verhalten sowie mit abnormalen vaskulären und fibrotischen Reaktionen in Verbindung gebracht. Zudem ist ROCK1 in Zusammenhänge von Apoptose und entzündlicher Signalgebung involviert und stellt damit einen relevanten Knotenpunkt dar, um das Zusammenspiel von Signalwegen in unterschiedlichen Zellmodellen zu untersuchen.

Das Rock-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ROCK1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ROCK1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ROCK1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rock-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ROCK1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rock-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ROCK1-Exone abzielen, die für die Rock-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ROCK1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rock-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rock-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ROCK1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rock-1 HDR-Plasmid (h) und Rock-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ROCK1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ROCK1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.