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RKIP双切口酶质粒(h) | sc-401270-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RKIP双切口酶质粒(h2) | sc-401270-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类 PEBP1 基因编码 Raf 激酶抑制蛋白(RKIP),这是一种保守的信号转导调节因子,可抑制 RAF1–MEK–ERK 信号通路,并能影响其他参与增殖、分化与应激反应的激酶网络。RKIP 还与 GPCR 激酶相关通路发生交互作用,并参与调控与 NF-κB 相关的炎症信号及细胞凋亡相关过程。通过这些作用,RKIP 有助于决定细胞在生长与死亡之间的命运选择,并对细胞迁移以及上皮–间质转化(EMT)程序产生下游影响。PEBP1/RKIP 的表达或活性异常与多种病理情境相关,包括肿瘤生物学以及神经炎症或神经退行性机制,因此是进行通路解析的一个有用节点。
RKIP 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 PEBP1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对PEBP1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏PEBP1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了PEBP1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。