RING1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405198-NIC

RING1 は RING フィンガータンパク質 1 をコードしており、ヒストン H2A の Lys119 におけるモノユビキチン化を担い、クロマチンの凝縮を促進する Polycomb 抑制複合体 1（PRC1）の中核的な触媒コンポーネントである。PRC1 依存的なエピジェネティックなサイレンシングを通じて、RING1 は発生に関わる遺伝子プログラム、系譜決定、ならびに Polycomb 標的座位における転写抑制状態の維持の制御に寄与する。RING1 は Polycomb シグナル伝達ネットワークと相互作用し、PRC2 による H3K27 トリメチル化と協調して、抑制的なクロマチン状態の安定化を支える。RING1/PRC1 活性の異常は、がんや発生障害で観察される異常な転写プログラムに関与するとされており、クロマチン制御や疾患関連エピジェネティクスの研究における有用性が示唆される。

RING1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RING1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RING1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RING1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RING1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。