Plásmido Doble Nickase (h) RING1: sc-405198-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)RING1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RING1 (h) y el plásmido de doble nickasa RING1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RING1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RING1 Anticuerpo (8C12F4): sc-517221
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) RING1 | sc-405198-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) RING1 | sc-405198-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RING1 codifica la proteína 1 de dedo RING, un componente catalítico central del complejo represor Polycomb 1 (PRC1) que media la monoubiquitinación de la histona H2A en la lisina 119 y favorece la compactación de la cromatina. A través del silenciamiento epigenético dependiente de PRC1, RING1 ayuda a controlar programas génicos del desarrollo, el compromiso de linaje y el mantenimiento de la represión transcripcional en los loci diana de Polycomb. RING1 interactúa con las redes de señalización de Polycomb y se coordina con la trimetilación de H3K27 impulsada por PRC2 para estabilizar estados de cromatina represivos. La actividad desregulada de RING1/PRC1 se ha implicado en programas transcripcionales aberrantes observados en cáncer y trastornos del desarrollo, lo que respalda su uso en estudios de regulación de la cromatina y epigenética asociada a enfermedad.
RING1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RING1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RING1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RING1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RING1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.