Plásmido Doble Nickase (m) RIG-I: sc-432915-NIC

El gen murino **Ddx58** codifica **RIG-I**, una helicasa de ARN citosólica de la familia **DExD/H-box** que funciona como receptor de reconocimiento de patrones para especies de ARN viral que presentan extremos **5′-trifosfato** y ARN de doble cadena corto. La unión del ligando desencadena una activación conformacional y la señalización a través de **MAVS**, promoviendo las vías de **TBK1/IKKε** e **IRF3/IRF7**, así como la de **NF-κB**, para impulsar programas génicos de **interferón de tipo I** e inflamación. La actividad de RIG-I modula la comunicación cruzada de la inmunidad innata con la presentación de antígeno, las redes de citocinas y la restricción antiviral intrínseca de la célula. La desregulación de la señalización de **Ddx58/RIG-I** se ha implicado en respuestas de interferón aberrantes y fenotipos asociados a la inflamación, lo que respalda estudios mecanísticos de la homeostasis inmunitaria y la biología de la infección en sistemas murinos.

RIG-I El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ddx58 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ddx58. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ddx58. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ddx58 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.