Rho T1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401601-ACT

RHOT1は、ミトコンドリア外膜に固定されている非典型的なRhoファミリーGTPアーゼであるRho T1（Miro1）をコードし、ミトコンドリアの輸送、配置、品質管理を協調的に制御します。Ca2+結合性のEFハンドドメインおよびキネシン／ダイニンのアダプターとの相互作用を介して、RHOT1はミトコンドリアを微小管依存的輸送に連結し、ミトコンドリアのダイナミクス、バイオエネルギー恒常性、ならびにPINK1/PRKN関連経路を含むマイトファジーを調節します。RHOT1機能の破綻は、ミトコンドリア分布の異常やオルガネラのターンオーバー不全と関連づけられており、これらは神経変性、ニューロパチー、その他ミトコンドリアストレス表現型を伴う疾患に関与する過程と考えられています。ミトコンドリア輸送の制御因子として、RHOT1は神経細胞モデル、酸化ストレス条件、ミトコンドリアネットワークの健全性や呼吸を評価するアッセイなどで頻繁に研究されています。

Rho T1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RHOT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rho T1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RHOT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRHOT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rho T1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRHOT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRho T1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRHOT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRho T1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。