RHBDL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405676-ACT

RHBDL1 (rhomboid-like 1) codifica uma protease intramembranar de serina da família rhomboid, localizada em membranas celulares, que regula o controle de qualidade de proteínas por meio do processamento proteolítico de substratos inseridos na membrana. Ao influenciar a renovação (turnover) de proteínas cliente selecionadas, a RHBDL1 contribui para vias de proteostase que se intersectam com a degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD), o tráfego de proteínas de membrana e a sinalização adaptativa ao estresse. Alterações na atividade de proteases intramembranares têm sido associadas à desregulação da sinalização celular e à remodelação do proteoma no câncer e em outros distúrbios caracterizados por estresse celular crônico, tornando a RHBDL1 um alvo relevante para estudos mecanísticos. A dinâmica de expressão de RHBDL1 também pode ser explorada para investigar como a proteólise de membrana molda a responsividade de vias em diversos contextos de células humanas.

RHBDL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RHBDL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RHBDL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RHBDL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RHBDL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RHBDL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RHBDL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RHBDL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RHBDL1 em células tumorais com expressão de RHBDL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.