Plásmido CRISPR de Activación (h) Rev-erbα: sc-401211-ACT

NR1D1 codifica el receptor nuclear Rev-erbα, un represor transcripcional de unión al hemo que conecta el reloj circadiano con programas génicos metabólicos e inflamatorios. Rev-erbα regula componentes centrales del reloj y redes transcripcionales que controlan la homeostasis de lípidos y glucosa, la función mitocondrial y la polarización de macrófagos mediante interacciones con correpresores como NCoR/HDAC3. Su actividad integra señales del ritmo circadiano, la señalización de receptores nucleares y las vías de detección del estado energético, modulando la temporización específica de cada tejido en la expresión génica. La desregulación de NR1D1 se ha asociado con alteraciones de la fisiología circadiana y se ha estudiado en contextos que incluyen disfunción metabólica, inflamación mediada por el sistema inmunitario y reprogramación transcripcional relacionada con el cáncer.

Rev-erbα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NR1D1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rev-erbα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NR1D1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NR1D1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rev-erbα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NR1D1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rev-erbα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rev-erbα en células tumorales con expresión de NR1D1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.