Renin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400890-ACT

ヒトRENは、アスパラギン酸プロテアーゼであるレニンをコードしている。レニンはアンジオテンシノーゲンを切断してアンジオテンシンIを生成することでレニン–アンジオテンシン–アルドステロン系（RAAS）を開始し、アンジオテンシンIIの産生と、それに続く血管トーヌスおよび電解質バランスを制御する下流シグナル伝達を調節する。レニン活性は、アルドステロン、交感神経系シグナル、腎におけるナトリウム取扱いに関わる内分泌フィードバックループと統合されており、腎生理を全身の血行動態と結び付けている。REN発現の異常やレニン経路の過剰な活性化は、高血圧、心血管リモデリング、ならびに慢性腎臓病に関連する病態生理に関与するとされる。傍糸球体細胞で主に産生される分泌酵素として、レニンは腎・血管系の細胞モデルにおける刺激―分泌連関や転写制御を研究するうえでも扱いやすい解析ノードとなる。

Renin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RENの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Renin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における REN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はREN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Reninの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のREN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRenin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびREN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRenin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。