Plásmido Doble Nickase (h) RELA/NFκB p65: sc-400004-NIC

RELA codifica la subunidad p65 de NFκB, un factor de transcripción central que forma heterodímeros (comúnmente con NFKB1/p50) para regular programas génicos inducibles que controlan la inflamación, las respuestas inmunitarias innata y adaptativa, la supervivencia celular y la señalización por estrés. En la señalización canónica de NFκB, estímulos aguas arriba como TNF, IL-1 y la activación de receptores de reconocimiento de patrones convergen en la fosforilación y degradación de IκB mediadas por IKK, lo que permite la translocación nuclear de p65 y la activación transcripcional. La actividad de RELA también está modulada por modificaciones postraduccionales y por el entrecruzamiento con las vías MAPK, JAK/STAT e interferón, lo que influye en la producción de citocinas, la resistencia a la apoptosis y la diferenciación celular. La desregulación de la señalización NFκB/RELA se implica con frecuencia en estados inflamatorios crónicos y en procesos oncogénicos, incluidos cambios en la señalización del microambiente tumoral y la activación de vías de supervivencia.

RELA/NFκB p65 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RELA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RELA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RELA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RELA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.