Ref-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400932-LAC

APEX1 codifica il fattore redox-1 multifunzionale (Ref-1/APE1), un nodo centrale che collega la riparazione per escissione di basi con la regolazione redox della trascrizione. In qualità di endonucleasi apurinica/apirimidinica, Ref-1 elabora i siti abasici generati durante danni ossidativi e da alchilazione, coordinando la successiva sintesi di riparazione per preservare la stabilità del genoma. Attraverso la sua attività redox, Ref-1 modula il legame al DNA di fattori di trascrizione coinvolti nella segnalazione da stress, nell’infiammazione e nelle decisioni sul destino cellulare, inclusi AP-1, NF-κB, HIF-1 e p53. Un’attività e un’espressione deregolate di APEX1/Ref-1 sono state associate a risposte al danno del DNA alterate e a programmi di adattamento redox osservati in diversi modelli di biologia del cancro, neurodegenerazione e malattie infiammatorie.

Le particelle di attivazione lentivirale Ref-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di APEX1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Ref-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione APEX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Ref-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo APEX1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.