RECK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402440-ACT

RECK (proteína rica em cisteína indutora de reversão, com motivos Kazal) é um regulador ancorado à membrana da remodelação da matriz extracelular que suprime a atividade de múltiplas metaloproteinases de matriz, incluindo MMP2, MMP9 e MT1-MMP. Ao limitar a proteólise na superfície celular, a RECK influencia a adesão célula–matriz, a migração e a arquitetura tecidual, com efeitos a jusante sobre a angiogênese e o comportamento invasivo. A RECK tem sido associada a contextos de sinalização que coordenam dinâmicas epitélio–mesênquima e interações com o estroma, e sua expressão alterada é frequentemente estudada em relação à progressão tumoral e ao potencial metastático. Essas propriedades tornam a RECK um nó útil para investigar a remodelação impulsionada por proteases, a regulação do microambiente e o “cross-talk” entre vias que governam a invasão celular.

RECK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RECK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RECK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RECK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RECK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RECK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RECK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RECK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RECK em células tumorais com expressão de RECK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.