Rbx1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402733-ACT

RBX1は、ユビキチンを基質へ転移させて主要な細胞タンパク質のプロテアソーム分解を制御するCullin–RING型E3ユビキチンリガーゼ（CRL）のRING-boxサブユニットであるRbx1をコードしている。CRL1/SCFおよび関連複合体を介して、Rbx1はサイクリン、CDK阻害因子、各種経路の制御因子の分解回転を制御することにより、細胞周期の進行、DNA複製ストレス応答、シグナル伝達に影響を及ぼす。RBX1依存的なユビキチン化はカリン（cullin）のネディル化（neddylation）と連動しており、CRLの活性化をプロテオスタシスおよびチェックポイント制御と結び付けている。RBX1/CRL活性の破綻は増殖能やゲノム安定性の変化と関連するため、RBX1はヒト細胞におけるがん性シグナル、ストレス適応、ならびにユビキチン経路の脆弱性を研究するうえで重要な結節点となる。

Rbx1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RBX1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rbx1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RBX1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRBX1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rbx1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRBX1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRbx1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRBX1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRbx1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。