Plásmido CRISPR de Activación (m) RBP2: sc-431972-ACT

El gen Kdm5a de ratón codifica RBP2, una desmetilasa de histonas de la familia JARID1 que elimina las marcas H3K4me3/2 para regular la actividad de promotores y potenciadores (enhancers). Al ajustar la accesibilidad de la cromatina y la salida transcripcional, RBP2 ayuda a coordinar la especificación de linaje, la progresión del ciclo celular y los programas de diferenciación, y puede interactuar con redes transcripcionales centrales y complejos de remodelación de cromatina. La actividad desregulada de Kdm5a/RBP2 se ha asociado con estados epigenéticos aberrantes vinculados a programas transcripcionales oncogénicos y a fenotipos del neurodesarrollo, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar el control epigenético de la expresión génica. En sistemas modelo de ratón, la manipulación de Kdm5a facilita la investigación mecanística sobre la regulación de vías impulsada por la cromatina, incluido el equilibrio entre represión y activación transcripcional y los programas génicos sensibles al estrés.

RBP2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Kdm5a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RBP2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Kdm5a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Kdm5a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RBP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Kdm5a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RBP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RBP2 en células tumorales con expresión de Kdm5a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.