RBFOX3/NeuN CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402976-ACT

RBFOX3（NeuNとしても知られる）は、UGCAUGモチーフを認識する神経細胞に富むRNA結合タンパク質をコードし、神経分化、シナプス成熟、ならびに神経細胞アイデンティティの維持に必須な選択的スプライシング・プログラムを制御する。エクソン取り込みとmRNAアイソフォームのバランスを調節することで、RBFOX3は細胞骨格ダイナミクス、神経突起伸長、活動依存的遺伝子発現を形作る転写後ネットワークに組み込まれている。RBFOXファミリーが指向するスプライシングは、興奮性／抑制性のバランスや神経回路の結合性を司る経路と関連しており、RBFOX3は神経発生と機能の研究において広く用いられるマーカーであると同時に制御因子でもある。RBFOX因子が関与する神経スプライシング・プログラムの破綻は、神経発達疾患および神経変性疾患の機序と関連づけられており、ヒト系でのRNAプロセシング異常をモデル化する上での重要性が示唆される。

RBFOX3/NeuN CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RBFOX3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RBFOX3/NeuN CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RBFOX3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRBFOX3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RBFOX3/NeuNの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRBFOX3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRBFOX3/NeuN依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRBFOX3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRBFOX3/NeuN経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。