Plásmido CRISPR de Activación (m) RB1CC1: sc-419502-ACT

Rb1cc1 codifica RB1CC1 (también conocido como FIP200), un componente central del complejo ULK1 iniciador de la autofagia, que coordina la formación de autofagosomas en respuesta al estado nutricional y al estrés celular. RB1CC1 también se interconecta con las vías de señalización de mTOR y AMPK para acoplar las rutas de factores de crecimiento y de detección energética al flujo autofágico, influyendo en el control de calidad mitocondrial y en la proteostasis. A través de estas funciones, RB1CC1 afecta la supervivencia celular, la inflamación y la homeostasis tisular, por lo que se estudia ampliamente en contextos como la neurodegeneración, la desregulación metabólica y la biología del cáncer. En modelos murinos, la modulación de RB1CC1 proporciona una herramienta mecanística para investigar programas de adaptación al estrés y el remodelado dependiente de la autofagia en diversos tipos celulares.

RB1CC1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Rb1cc1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RB1CC1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Rb1cc1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Rb1cc1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RB1CC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Rb1cc1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RB1CC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RB1CC1 en células tumorales con expresión de Rb1cc1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.