Ras-GRF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422605
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Ras-GRF1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Ras-GRF1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Ras-GRF1 Anticorpo (D-12): sc-377234
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Ras-GRF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422605 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Rasgrf1 codifica a Ras-GRF1, um fator de troca de nucleotídeos de guanina regulado por cálcio/calmodulina que ativa GTPases da família Ras e acopla a atividade neuronal à sinalização MAPK/ERK a jusante. Em camundongos, Ras-GRF1 contribui para a plasticidade sináptica, a aprendizagem e a memória e a expressão gênica dependente de atividade por meio da modulação de vias ligadas a Ras e Rap, com papéis adicionais na sinalização associada à insulina/IGF e no controle de crescimento em tecidos específicos. Por meio desses nós de sinalização, Ras-GRF1 influencia a proliferação e a diferenciação celulares e a dinâmica do citoesqueleto, tornando-se relevante para estudos de fenótipos do neurodesenvolvimento e de biologia da via Ras desregulada. A alteração da função de Ras-GRF1 tem sido investigada em contextos de sinalização neuronal aberrante e remodelamento de vias oncogênicas, sustentando seu uso como um ponto de entrada mecanístico para a dissecação de vias.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ras-GRF1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rasgrf1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rasgrf1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rasgrf1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ras-GRF1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rasgrf1 para a investigação da sinalização de Ras-GRF1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rasgrf1 críticos para a função Ras-GRF1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rasgrf1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Ras-GRF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Ras-GRF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rasgrf1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Ras-GRF1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Ras-GRF1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rasgrf1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rasgrf1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.