Plásmido Doble Nickase (h) RANKL: sc-400304-NIC

TNFSF11 codifica el ligando del receptor activador de NF-κB (RANKL), una citocina soluble y transmembrana de tipo II de la superfamilia TNF que señaliza a través de TNFRSF11A/RANK para regular la diferenciación, activación y supervivencia de los osteoclastos. La interacción RANKL–RANK desencadena la señalización canónica y no canónica de NF-κB, así como programas de transcripción impulsados por MAPK y NFATc1, coordinando el remodelado óseo y su acoplamiento con la función de las células inmunitarias. La desregulación de la señalización de RANKL se asocia estrechamente con la osteólisis inflamatoria y los procesos de pérdida ósea, incluida la osteoporosis y la erosión articular vinculada a la artritis reumatoide, y contribuye a microambientes osteolíticos asociados a tumores. Dado que RANKL también modula las interacciones entre células dendríticas y células T y el remodelado específico de tejidos, TNFSF11 se estudia ampliamente en modelos de osteoinmunología y biología esquelética.

RANKL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TNFSF11 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TNFSF11. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TNFSF11. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TNFSF11 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.