Ral B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425679

概要

Ralb は低分子量GTPアーゼである Ral B をコードしており、GDP結合型とGTP結合型の間を循環する Ras 様の分子スイッチとして、膜輸送および細胞骨格の再構築を調節します。Ral B はエキソシスト複合体や RalBP1 などのエフェクターを介してシグナルを伝達し、小胞のドッキング、エンドサイトーシス、細胞極性、細胞質分裂を制御します。また、TBK1 活性化に関連する経路を通じて、ストレス応答や自然免疫シグナル伝達とも連携し得ます。これらの過程を通して Ral B は、がん遺伝子 Ras ネットワークの出力や腫瘍細胞浸潤の文脈でしばしば研究される、細胞増殖・遊走・生存プログラムに影響を与えます。マウスモデルでは、Ralb の機能撹乱により、がん生物学や炎症関連表現型に関与する低分子量GTPアーゼのシグナル伝達ノードについて、作用機序の検討が可能になります。

Ral B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRalb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ralb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ralbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ral Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ral Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ralb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ral Bの機能に不可欠なRalbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ralbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ral B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRal B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ralb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ral B HDRプラスミド（m）および Ral B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRalbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRalb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。