Rag C CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424807

概要

Rragc は、リソソーム局在性の小型 GTPase である Rag C をコードしており、RagA または RagB とヘテロ二量体を形成することで、細胞内アミノ酸の利用可能性をリソソームにおける mTORC1 のリクルートおよび活性化へと結び付けます。Ragulator 複合体や下流の mTORC1 エフェクターとの相互作用を通じて、Rag C は栄養シグナルに応答したタンパク質合成、オートファジー、リソソーム生合成、代謝リプログラミングの制御に寄与します。Rag GTPase シグナルの異常は栄養感知チェックポイントを乱し、増殖制御、免疫細胞機能、細胞ストレス適応に関連する表現型に関与することが示唆されています。マウス系では、Rag C は発生や疾患関連の文脈にわたって、mTOR 駆動性の増殖と異化代謝のバランスに関する機構研究を支える要素となります。

Rag C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRragc遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rragc内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rragcのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rag Cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rag Cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rragc欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rag Cの機能に不可欠なRragcエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rragcゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rag C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRag C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rragc遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rag C HDRプラスミド（m）および Rag C HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRragcホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRragc標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。