Radixin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403440-ACT

ヒトRDXは、ERMファミリーに属する細胞骨格アダプタータンパク質であるラディキシンをコードしており、細胞皮質のFアクチンを膜貫通タンパク質に連結することで、膜ドメインの編成、細胞形状の制御、ならびに細胞—細胞および細胞—細胞外マトリックス間の接着の安定化に寄与します。ラディキシンは、微絨毛や接着部位などの構造におけるアクチン皮質のリモデリングに関与し、RhoファミリーGTPアーゼ、PI3K依存性経路、受容体の局在化とトラフィッキングを協調的に制御するスキャフォールディング複合体を介したシグナル伝達を統合します。機械刺激のシグナル変換（メカノトランスダクション）および膜—細胞骨格カップリングにおける役割を通じて、ラディキシンは上皮極性、遊走、エンドサイトーシスなどの過程に影響を与えます。ERM機能の破綻やRDXの発現量・局在の変化は、がん細胞の浸潤・転移に関連する表現型に加え、バリア組織や神経系といった文脈における組織特異的な機能不全とも関連づけられています。

Radixin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RDXの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Radixin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RDX 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRDX転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Radixinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRDX遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRadixin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRDX発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRadixin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。