Plásmido Doble Nickase (h) Rad54B: sc-403794-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Rad54B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Rad54B (h) y el plásmido de doble nickasa Rad54B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RAD54B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rad54B Anticuerpo (19-K2): sc-101234
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Rad54B | sc-403794-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Rad54B | sc-403794-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAD54B codifica Rad54B, una ATPasa dependiente de ADN de la familia SWI2/SNF2 que actúa en la recombinación homóloga al cooperar con RAD51 para remodelar el ADN y promover la invasión de cadena durante la reparación de roturas de doble hebra. Rad54B contribuye a la estabilidad del genoma mediante funciones en la señalización de la respuesta al daño del ADN, la reparación asociada a la replicación y la recuperación tras estrés genotóxico, lo que la vincula a las vías centrales de recombinación homóloga y a las rutas de control del ciclo celular mediadas por recombinación. La actividad alterada de RAD54B puede aumentar la inestabilidad cromosómica y la carga mutacional, características que se estudian con frecuencia en el contexto de la biología tumoral y de estados con defectos de reparación del ADN. En consecuencia, RAD54B se investiga ampliamente por su impacto en la eficiencia de recombinación, la sensibilidad a agentes que dañan el ADN y los mecanismos que gobiernan el mantenimiento fiel de los cromosomas.
Rad54B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RAD54B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RAD54B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RAD54B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RAD54B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.