Rad54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401750

概要

RAD54Lは、RAD51と協調して相同組換えを促進するSWI2/SNF2ファミリーのクロマチンリモデリング因子である、ヒトRad54 DNA依存性ATPアーゼをコードします。Rad54はRAD51のプレシナプスフィラメントを安定化・再構築し、鎖侵入を促進するとともに、複製ストレス下でのDNA二本鎖切断修復を支えて、ゲノムの安定性と細胞周期チェックポイント機能の維持に寄与します。本タンパク質は相同組換えおよびDNA損傷応答ネットワーク内で機能し、主要な修復因子と相互作用して組換え中間体の処理を制御します。RAD54L活性の変化は、がん生物学やDNA修復不全モデルで頻繁に研究される染色体不安定性表現型と関連しています。

Rad54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAD54L遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAD54L内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAD54Lのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rad54タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rad54シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAD54L欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rad54の機能に不可欠なRAD54Lエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAD54Lゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rad54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRad54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAD54L遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rad54 HDRプラスミド（h）および Rad54 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAD54Lホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAD54L標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。