Rac GAP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402969-ACT

RACGAP1 codifica a proteína ativadora de GTPase Rac 1 (Rac GAP1), um regulador da família Rho que coordena a remodelação do citoesqueleto com a progressão do ciclo celular. Rac GAP1 é um componente central do complexo centralspindlin e dá suporte à formação do anel contrátil dependente de RhoA, à organização da zona média do fuso e à conclusão da citocinese. Por meio da modulação da sinalização de Rac1/Cdc42 e da maquinaria mitótica, RACGAP1 influencia a polaridade celular, a migração e a estabilidade cromossômica. A expressão desregulada de RACGAP1 tem sido associada a fenótipos proliferativos e à instabilidade genômica na biologia do câncer, tornando-o relevante para estudos do controle mitótico e de programas de divisão de células tumorais.

Rac GAP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RACGAP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rac GAP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RACGAP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RACGAP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rac GAP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RACGAP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rac GAP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rac GAP1 em células tumorais com expressão de RACGAP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.