Rab11-FIP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405735

Panoramica

RAB11FIP3 codifica la Rab11 family-interacting protein 3 (Rab11-FIP3), un effettore di Rab11 che coordina la funzione degli endosomi di riciclo e il traffico di membrana durante la citocinesi. Rab11-FIP3 contribuisce a indirizzare il riciclo endocitico e il targeting delle vescicole verso il corpo intermedio (midbody), supportando l’abscissione e la corretta progressione del ciclo cellulare, e si integra con vie di trasporto dipendenti da RAB11 che modellano il riciclo dei recettori e la polarità cellulare. Grazie al suo ruolo nella dinamica degli endosomi di riciclo, Rab11-FIP3 contribuisce a processi che influenzano la migrazione e la proliferazione cellulare, risultando quindi rilevante per studi sul traffico intracellulare deregolato in fenotipi associati al cancro. Un’espressione alterata o perturbazioni funzionali di Rab11-FIP3 sono state inoltre collegate a difetti nella divisione cellulare e nelle vie di rimodellamento di membrana che possono compromettere la stabilità genomica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab11-FIP3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RAB11FIP3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RAB11FIP3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RAB11FIP3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rab11-FIP3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RAB11FIP3 per lo studio della segnalazione di Rab11-FIP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RAB11FIP3 critici per la funzione di Rab11-FIP3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RAB11FIP3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rab11-FIP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rab11-FIP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RAB11FIP3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rab11-FIP3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rab11-FIP3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RAB11FIP3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RAB11FIP3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.