Rab GDI β Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404136-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Rab GDI βO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Rab GDI β (h) e o Plasmídeo Double Nickase Rab GDI β (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GDI2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Rab GDI β Anticorpo (D-2): sc-515143
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Rab GDI β Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404136-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab GDI β Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404136-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GDI2 codifica o inibidor beta de dissociação de GDP de Rab (Rab GDI β), uma chaperona citosólica que se liga a GTPases Rab preniladas e regula a sua extração das membranas e a sua reciclagem entre compartimentos do sistema endomembranar. Ao controlar a disponibilidade de Rab e o direcionamento para membranas, a Rab GDI β influencia eventos de brotamento, transporte e fusão de vesículas, centrais para a endocitose, exocitose e o tráfego do Golgi para endossomos. Essa regulação afeta a renovação de receptores, a dinâmica da via secretora e a identidade de organelas no âmbito do ciclo das GTPases Rab. Alterações no tráfego de Rab e na função de reguladores de Rab estão implicadas em respostas ao estresse celular e em mudanças de proteostase observadas em diversos contextos relevantes para doenças, o que sustenta o uso de perturbações de GDI2 para investigar fenótipos dependentes de tráfego.
Rab GDI β O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GDI2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GDI2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GDI2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GDI2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.