Rab GDI β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404136

概要

GDI2はRab GDP解離阻害因子β（Rab GDI β）をコードしており、プレニル化されたRab GTPアーゼに結合して、それらが膜と細胞質の間を循環する過程を制御する細胞質性の調節因子です。Rabの局在と活性化可能性（利用可能性）を調節することで、Rab GDI βは、エンドサイトーシス輸送、リサイクリング経路、ゴルジ体からエンドソームへの輸送に不可欠な小胞の出芽・係留・融合といった段階の協調に寄与します。Rab GDI βの機能が乱れると膜輸送の恒常性が破綻し、受容体のターンオーバー、シグナルの区画化、オルガネラ動態などに影響を及ぼし得ます。小胞輸送とプロテオスタシスが重要となるがん生物学や神経生物学に関連した細胞表現型の文脈で、Rab GDI2の発現や制御の変化が検討されてきました。

Rab GDI β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGDI2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GDI2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GDI2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab GDI βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab GDI βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GDI2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab GDI βの機能に不可欠なGDI2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GDI2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab GDI β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRab GDI β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GDI2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab GDI β HDRプラスミド（h）および Rab GDI β HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGDI2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGDI2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。