Partículas Lentivirales de Activación (h) Rab 44: sc-418677-LAC

RAB44 codifica Rab 44, una pequeña GTPasa atípica de la familia Rab implicada en la regulación del tráfico intracelular de membranas, la maduración de vesículas y la dinámica endolisosomal. Como proteína interruptora que alterna entre estados unidos a GTP y a GDP, se considera que Rab 44 influye en la identidad de los compartimentos y en el direccionamiento de la carga, en intersección con vías secretoras y degradativas, incluidos procesos acoplados a la función de células inmunitarias y a la señalización inflamatoria. La actividad desregulada de las GTPasas Rab puede alterar el recambio de receptores, el procesamiento de antígenos y la transducción de señales, lo que convierte a RAB44 en un objetivo relevante para estudiar la reprogramación de vías en contextos de cáncer y enfermedades asociadas al sistema inmunitario. El análisis funcional de RAB44 sustenta estudios mecanísticos que vinculan el control del tráfico con estados de activación celular, respuestas al estrés y proteostasis.

Las partículas de activación lentiviral Rab 44 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RAB44 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Rab 44 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RAB44, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Rab 44. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RAB44 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.