Rab 25 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424753
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Rab 25 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Rab 25, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Rab 25 Anticorpo (3F12F3): sc-65978
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Rab 25 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424753 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Rab25 codifica a pequena GTPase Rab25, um membro da subfamília Rab11 que regula o tráfego de membranas, incluindo a reciclagem endocítica e o transporte polarizado de receptores e integrinas em células epiteliais. Ao controlar o brotamento, o ancoramento e a fusão de vesículas, a Rab25 influencia a polaridade celular, a migração e a intensidade da sinalização proveniente de receptores de superfície que se acoplam a vias como PI3K–AKT e à reciclagem de receptores de fatores de crescimento. A desregulação da atividade de RAB25 tem sido associada a alterações na homeostase epitelial e a fenótipos ligados a tumores em múltiplos tecidos, tornando-a relevante para o estudo de invasão, de programas de tráfego associados à metástase e de funções oncogénicas ou supressoras de tumor dependentes do contexto. Em modelos murinos, a perturbação de Rab25 permite investigações mecanísticas de redes de transporte vesicular no desenvolvimento e em comportamentos celulares relevantes para doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rab 25 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rab25 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rab25, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rab25 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rab 25.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rab25 para a investigação da sinalização de Rab 25, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rab25 críticos para a função Rab 25
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rab25 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Rab 25 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Rab 25 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rab25. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Rab 25 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Rab 25 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rab25 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rab25 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.