Rab 1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422550

概要

Rab1aは、小型GTPアーゼであるRab 1Aをコードしており、小胞の出芽、係留、融合などの過程を含むER（小胞体）からゴルジ体への輸送およびゴルジ体内輸送を協調させることで、初期分泌輸送を制御します。Rab 1AはGTP結合型とGDP結合型を循環しながら、ゴルジ体の構造、タンパク質のプロセシング、カーゴ輸送に影響するエフェクター複合体と相互作用し、プロテオスタシスおよびオルガネラの恒常性を支えます。Rab1a依存的な輸送は、膜供給と区画の成熟を制御することで、オートファジーやリソソーム経路とも連携します。Rab1a関連輸送の破綻は、文献上、細胞ストレス応答や神経変性およびがん原性シグナル伝達の文脈に関連する表現型と結び付けられており、マウスモデルにおける膜輸送駆動型の疾患メカニズムを研究するうえで有用なノードとなります。

Rab 1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRab1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rab1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rab1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab 1Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab 1Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rab1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab 1Aの機能に不可欠なRab1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rab1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab 1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRab 1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rab1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab 1A HDRプラスミド（m）および Rab 1A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRab1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRab1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。