PTPσ Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422531-ACT

O gene **Ptprs** de camundongo codifica a **proteína tirosina fosfatase sigma (PTPσ)**, uma fosfatase do tipo receptor enriquecida em contextos neurais e epiteliais que integra sinais da matriz extracelular com eventos intracelulares de desfosforilação para modular a adesão celular, o crescimento de neuritos, a orientação axonal e a organização sináptica. A PTPσ interage com proteoglicanos de **heparan sulfato** e **condroitin sulfato**, conectando a matriz pericelular à remodelação do citoesqueleto e a módulos de sinalização que influenciam o comportamento do cone de crescimento e a plasticidade dos circuitos. Por meio da modulação de vias dependentes de fosforilação, **Ptprs** contribui para a sinalização dependente de contato e o padrão de organização tecidual, e alterações na atividade da PTPσ têm sido associadas na literatura a fenótipos do neurodesenvolvimento, regeneração prejudicada e comunicação célula–célula desregulada. Essas características tornam **Ptprs** um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização controlada por fosfatases na conectividade neuronal e na regulação do microambiente.

PTPσ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ptprs sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTPσ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ptprs em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ptprs, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTPσ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ptprs nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTPσ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTPσ em células tumorais com expressão de Ptprs silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.