PTPσ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402631-ACT

PTPRS codifica a proteína tirosina fosfatase receptora do tipo S (PTPσ), uma fosfatase do tipo receptor que modula a sinalização dependente de fosforilação na superfície celular. A PTPσ participa na adesão celular, na orientação axonal e na organização de sinapses, integrando sinais da matriz extracelular e de proteoglicanos com vias intracelulares de quinases que controlam a dinâmica do citoesqueleto e o crescimento de neuritos. No sistema nervoso, alterações na sinalização de PTPσ têm sido associadas a respostas regenerativas comprometidas e ao remodelamento sináptico, enquanto, em contextos oncológicos, a desregulação de PTPRS tem sido relacionada a perturbações na sinalização por fatores de crescimento e a mudanças na migração celular. Essas características biológicas tornam o PTPRS um alvo útil para dissecar redes de sinalização por fosfotirosina que governam diferenciação, conectividade e fenótipos invasivos em modelos celulares humanos.

PTPσ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTPRS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTPσ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTPRS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTPRS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTPσ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTPRS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTPσ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTPσ em células tumorais com expressão de PTPRS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.