PTPμ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403126-ACT

PTPRM codifica a fosfatase de tirosina proteica do tipo receptor mu (PTPμ), uma fosfatase transmembranar de passagem única que medeia a adesão homofílica célula–célula e conecta contactos extracelulares à desfosforilação intracelular de tirosinas. Por meio da regulação de complexos cadherina–catenina e de substratos juncionais, a PTPμ influencia a função de barreira epitelial e endotelial, a migração celular e a organização do citoesqueleto. A atividade de PTPRM interage com a sinalização de recetores tirosina-quinase e com vias a jusante, como MAPK e PI3K/AKT, ao ajustar limiares de sinalização dependentes de fosforilação. Alterações na expressão de PTPRM ou no controlo da sua fosforilação têm sido associadas a adesão desregulada e fenótipos invasivos em múltiplos contextos relevantes para doenças, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos da organização dos tecidos e do equilíbrio de sinalização.

PTPμ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTPRM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTPμ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTPRM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTPRM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTPμ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTPRM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTPμ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTPμ em células tumorais com expressão de PTPRM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.