PSR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430761-ACT

O gene **Jmjd6** de camundongo codifica a proteína **PSR**, uma dioxigenase dependente de 2-oxoglutarato que influencia o controle transcricional e o processamento de RNA por meio da hidroxilação de lisina e da desmetilação de arginina em substratos nucleares. A PSR tem sido associada à regulação do splicing alternativo e de programas de expressão gênica associados à cromatina, conectando-se a vias que coordenam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a transcrição responsiva ao estresse. A atividade desregulada de **JMJD6/PSR** tem sido relacionada a sinalização proliferativa aberrante e a alterações na expressão de genes do desenvolvimento, tornando-a relevante para estudos mecanísticos em biologia do câncer, vias relacionadas à fibrose e especificação de linhagens celulares. Em sistemas murinos, a perturbação de **Jmjd6** é comumente utilizada para investigar mecanismos epigenéticos e pós-transcricionais que moldam a identidade celular.

PSR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Jmjd6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Jmjd6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Jmjd6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Jmjd6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSR em células tumorais com expressão de Jmjd6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.