PSGL-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401534-ACT

SELPLGはPセレクチン糖タンパク質リガンド-1（PSGL-1）をコードしており、PSGL-1は白血球に強く発現するムチン様の接着受容体です。PSGL-1はセレクチンに結合することで、活性化した血管内皮上でのテザリング（係留）とローリング（転がり）を仲介します。PSGL-1は、糖鎖修飾に依存した認識モチーフと細胞内シグナル伝達を統合し、白血球のトラフィッキング、免疫シナプス形成、炎症部位への動員を協調的に制御します。この軸は血管炎症や自然免疫／獲得免疫の調節とも交差し、サイトカイン応答や細胞間相互作用を形作る経路に影響を与えます。SELPLG/PSGL-1の機能や発現の破綻は、炎症性・自己免疫性の表現型に加え、腫瘍—免疫微小環境のダイナミクスとも関連づけられており、免疫学および腫瘍学における機序研究の観点から重要なノードとなっています。

PSGL-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SELPLGの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PSGL-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SELPLG 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSELPLG転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PSGL-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSELPLG遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPSGL-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSELPLG発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPSGL-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。