PRX III Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401730-ACT

PRDX3 codifica a peroxirredoxina III humana (PRX III), uma peroxidase dependente de tiorredoxina localizada na mitocôndria que desintoxica o peróxido de hidrogénio e os hidroperóxidos lipídicos, mantendo a homeostase redox. Ao limitar as espécies reativas de oxigénio mitocondriais, a PRX III dá suporte à fosforilação oxidativa, preserva a integridade da membrana mitocondrial e influencia vias de sinalização sensíveis ao estado redox que modulam o metabolismo, a apoptose e as respostas inflamatórias. Alterações na expressão ou na atividade de PRDX3 são frequentemente estudadas no contexto da biologia do stress oxidativo, da disfunção mitocondrial e da adaptação redox associada a mecanismos de cancro, neurodegeneração e doenças cardiometabólicas. Como componente-chave da rede antioxidante mitocondrial, a PRX III é frequentemente utilizada para investigar alterações na expressão génica, na bioenergética e nas vias de resposta ao stress impulsionadas por ROS.

PRX III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRDX3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRX III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRDX3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRDX3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRX III. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRDX3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRX III no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRX III em células tumorais com expressão de PRDX3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.