PRIM2A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422397

Visão geral

Prim2 codifica a PRIM2A, a grande subunidade catalítica da primase de DNA no complexo Pol α–primase, que sintetiza iniciadores (primers) RNA–DNA necessários para iniciar a replicação do DNA tanto na fita líder quanto na fita retardada. A PRIM2A dá suporte ao disparo das origens de replicação, à iniciação dos fragmentos de Okazaki e à progressão global da fase S, e sua função está estreitamente integrada à montagem do replissoma e à troca de polimerases de DNA. Espera-se que a desorganização da atividade da primase aumente o estresse replicativo, comprometa a estabilidade das forquilhas de replicação e eleve a dependência de vias de resposta a danos no DNA e de checkpoints. Como um fator central de replicação, a PRIM2A é amplamente relevante para estudos de manutenção do genoma, controle da proliferação celular e mecanismos que ligam defeitos de replicação à biologia de doenças associadas à instabilidade genômica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PRIM2A (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Prim2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Prim2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Prim2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PRIM2A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Prim2 para a investigação da sinalização de PRIM2A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Prim2 críticos para a função PRIM2A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Prim2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PRIM2A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PRIM2A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Prim2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PRIM2A Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PRIM2A (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Prim2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Prim2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.