PRDM14 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404426-NIC

PRDM14は、PR/SETドメインを含む転写制御因子をコードしており、エピジェネティック制御および転写制御を通じて、多能性プログラムと生殖細胞としての能力（コンピテンス）の確立と維持に寄与します。ヒト細胞においてPRDM14は、クロマチン状態やDNAメチル化のランドスケープを調節し、系譜決定、リプログラミング効率、発生過程の遺伝子制御ネットワークに影響を及ぼします。PRDM14の異常発現や多能性回路の破綻は、複数の腫瘍環境において分化状態の変化や腫瘍性の転写プログラムと関連づけられています。幹細胞性（stemness）関連経路における結節点として、PRDM14はエピジェネティック制御、細胞運命決定、転写因子ネットワークの安定性の機構を解明する目的で、しばしば解析対象となります。

PRDM14 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PRDM14 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PRDM14内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PRDM14の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PRDM14が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。