PRDM14 Plasmide Double Nickase (h): sc-404426-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PRDM14 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PRDM14 Double Nickase Plasmid (h) e il PRDM14 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PRDM14. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PRDM14 Antibody (F-10): sc-518186
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PRDM14 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404426-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PRDM14 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404426-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRDM14 codifica un regolatore trascrizionale contenente un dominio PR/SET che contribuisce a instaurare e mantenere i programmi di pluripotenza e la competenza delle cellule germinali attraverso il controllo epigenetico e trascrizionale. Nelle cellule umane, PRDM14 modula lo stato della cromatina e i profili di metilazione del DNA, influenzando l’impegno di linea, l’efficienza di riprogrammazione e le reti regolatorie dei geni dello sviluppo. Un’espressione aberrante di PRDM14 e una deregolazione dei circuiti di pluripotenza sono state associate a stati di differenziamento alterati e a programmi trascrizionali oncogenici in diversi contesti tumorali. In quanto nodo di vie associate alla “stemness”, PRDM14 viene frequentemente studiato per analizzare i meccanismi di regolazione epigenetica, le decisioni di destino cellulare e la stabilità delle reti di fattori di trascrizione.
PRDM14 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRDM14 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRDM14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRDM14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRDM14 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.