PRCC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407693-ACT

PRCC（乳頭状腎細胞がん転座関連）は、RNA処理や制御に関わる複合体との相互作用を介して、pre-mRNAスプライシングおよび転写制御に関与するとされる核内タンパク質をコードします。PRCCは、遺伝子発現の忠実性、細胞周期の進行、核構造の維持を司る細胞プログラムに寄与します。とりわけPRCCは、乳頭状腎細胞がんで見られる染色体再構成への関与でよく知られており、PRCCに関連する制御が変化すると下流の転写ネットワークが攪乱され得ます。研究標的としてのPRCCは、スプライソソーム関連機構、がん性の転写制御異常、ならびに増殖やストレス応答経路に対する状況依存的な影響の解析に役立ちます。

PRCC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRCCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PRCC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRCC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRCC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PRCCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRCC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPRCC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRCC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPRCC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。