PPP1R6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406901

Panoramica

PPP1R3D codifica la subunità regolatoria PPP1R6, un adattatore di indirizzamento al glicogeno che dirige la proteina fosfatasi 1 (PP1) verso substrati coinvolti nell’immagazzinamento dei carboidrati e nell’omeostasi energetica. Modulando la localizzazione di PP1 e l’accesso al suo sito catalitico, PPP1R6 può influenzare lo stato di fosforilazione degli enzimi del metabolismo del glicogeno e, di conseguenza, modellare la sintesi e la mobilizzazione del glicogeno nelle cellule umane. Questo nodo regolatorio interseca reti di segnalazione di nutrient-sensing e di chinasi/fosfatasi che coordinano il flusso metabolico, le condizioni di crescita cellulare e le risposte allo stress. Un’alterata gestione del glicogeno e una segnalazione fosfatasica disfunzionale sono caratteristiche ricorrenti di patologie metaboliche e proliferative, rendendo PPP1R6 un punto di ingresso utile per studi meccanicistici sulla fosforegolazione in contesti rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PPP1R6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PPP1R3D in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PPP1R3D insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PPP1R3D a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PPP1R6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PPP1R3D per lo studio della segnalazione di PPP1R6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PPP1R3D critici per la funzione di PPP1R6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PPP1R3D per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PPP1R6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PPP1R6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PPP1R3D. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PPP1R6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PPP1R6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PPP1R3D per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PPP1R3D definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.