PPM1H CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412800

概要

PPM1Hは、タンパク質ホスファターゼMg2+/Mn2+依存性1Hをコードしており、PP2Cファミリーに属するセリン／スレオニンホスファターゼです。細胞の恒常性に関与する標的タンパク質を脱リン酸化することでキナーゼシグナル伝達に拮抗します。リン酸化依存的な経路の調節を介して、PPM1Hは細胞増殖、ストレス応答、ならびにエンドソーム輸送やタンパク質分解回転に影響する過程を含むプロテオスタシスの制御に関連づけられてきました。PPM1Hの発現量や活性が変化するとシグナルネットワークの動態が変わり得るため、がんに関連したリン酸化シグナルの再配線や、ホスファターゼ—キナーゼのバランスが崩れる他の疾患の文脈でも研究されてきました。その結果、PPM1Hはリン酸化駆動型の表現型や経路間クロストークの機序解析に有用なノードとなっています。

PPM1H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPPM1H遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PPM1H内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PPM1Hのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PPM1Hタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PPM1Hシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PPM1H欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PPM1Hの機能に不可欠なPPM1Hエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PPM1Hゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PPM1H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPPM1H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PPM1H遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PPM1H HDRプラスミド（h）および PPM1H HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPPM1Hホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPPM1H標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。