PP2Cκ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433975
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PP2Cκ O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PP2Cκ, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PP2Cκ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-433975 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O Ppm1k de camundongo codifica a fosfatase proteica mitocondrial PP2Cκ, uma fosfatase de serina/treonina dependente de Mg2+/Mn2+ que regula o catabolismo dos aminoácidos de cadeia ramificada (BCAA) ao desfosforilar o complexo desidrogenase de α-cetoácidos de cadeia ramificada (BCKDH). Ao controlar a atividade do BCKDH, a PP2Cκ influencia o fluxo de nutrientes mitocondrial, a homeostase energética e a sinalização metabólica ligada à disponibilidade de aminoácidos. A disfunção de Ppm1k tem sido associada a níveis alterados de BCAA e a estresse metabólico mitocondrial, tornando-o relevante para estudos de erros inatos do metabolismo e de fenótipos metabólicos mais amplos nos quais o processamento de BCAA está perturbado.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PP2Cκ (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ppm1k em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ppm1k, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ppm1k na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PP2Cκ.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ppm1k para a investigação da sinalização de PP2Cκ, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ppm1k críticos para a função PP2Cκ
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ppm1k para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PP2Cκ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PP2Cκ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ppm1k. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PP2Cκ Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PP2Cκ (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ppm1k para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ppm1k definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.