PP2Cα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403960-ACT

PPM1Aは、セリン／スレオニンホスファターゼであるPP2Cαをコードしている。PP2CαはMg²⁺/Mn²⁺依存性のPP2Cファミリーに属し、経路の主要因子を脱リン酸化することで、ストレス活性化キナーゼシグナル伝達に拮抗する。PP2Cαは、遺伝毒性および炎症性刺激に対する細胞応答を調節し、MAPKカスケード、NF-κBに連動するシグナル出力、ならびに細胞周期チェックポイント制御の調節に関与することが報告されている。リン酸化依存的なシグナル伝達の閾値を調整することで、PPM1Aはアポトーシス、分化、自然免疫プログラムに影響を与える。PP2Cαの活性または発現の異常は、がん生物学や免疫関連病態など複数の疾患関連文脈で観察される、ストレス適応やシグナル伝達表現型の変化と関連づけられている。

PP2Cα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPM1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PP2Cα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPM1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPM1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PP2Cαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPM1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPP2Cα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPM1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPP2Cα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。