PP2B-B1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422386
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PP2B-B1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PP2B-B1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PP2B-B1 Anticorpo (70-A): sc-130393
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PP2B-B1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422386 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ppp3r1 codifica a subunidade regulatória B1 da PP2B (calcineurina B1), um parceiro essencial de ligação a Ca2+ que estabiliza e modula a atividade fosfatase da calcineurina. Por meio de sinalização dependente de Ca2+/calmodulina, a calcineurina controla a desfosforilação de substratos como os fatores de transcrição NFAT, conectando o fluxo de cálcio a programas transcricionais que governam a ativação imunológica, a plasticidade neuronal e a remodelação muscular. Em modelos murinos, a sinalização dependente de PPP3R1 interage com vias que regulam respostas do receptor de células T, a função sináptica e a remodelação associada à hipertrofia cardíaca, tornando-a relevante para estudos de inflamação, neurobiologia e sinalização adaptativa ao estresse. A atividade desregulada da calcineurina é amplamente implicada em remodelação patológica e disfunção imune, posicionando a PP2B-B1 como um nó mecanístico para dissecação de vias em sistemas relevantes para doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PP2B-B1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ppp3r1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ppp3r1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ppp3r1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PP2B-B1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ppp3r1 para a investigação da sinalização de PP2B-B1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ppp3r1 críticos para a função PP2B-B1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ppp3r1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PP2B-B1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PP2B-B1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ppp3r1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PP2B-B1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PP2B-B1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ppp3r1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ppp3r1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.