PP2B-Aα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401810-ACT

PPP3CA codifica a subunidade catalítica Aα da calcineurina (PP2B-Aα), uma fosfatase de serina/treonina dependente de Ca2+/calmodulina que conecta sinais intracelulares de cálcio a programas transcricionais e sinápticos dependentes de fosforilação. A calcineurina desfosforila substratos-chave, incluindo fatores de transcrição NFAT, regulando assim a expressão gênica dependente de cálcio, a sinalização imune e o remodelamento neuronal dependente da atividade. Em tecidos excitáveis, a PPP3CA contribui para a plasticidade sináptica e a regulação de canais iônicos, enquanto, em contextos mais amplos, integra o fluxo de Ca2+ a nós de sinalização controlados por MAPK e por fosfatases. Alterações na atividade da calcineurina e a desregulação de PPP3CA têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos, bem como a sinalização inflamatória desregulada, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos focados em vias.

PP2B-Aα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPP3CA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PP2B-Aα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPP3CA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPP3CA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PP2B-Aα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPP3CA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PP2B-Aα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PP2B-Aα em células tumorais com expressão de PPP3CA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.