Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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PP1β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422378
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PP1β Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PP1β, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PP1β Antibody (A-6): sc-365678
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PP1β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422378 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Ppp1cb codifica la fosfatasi proteica 1 beta (PP1β), una subunità catalitica della fosfatasi proteica 1 serina/treonina che controbilancia la segnalazione mediata da chinasi defosforilando diversi substrati in modo dipendente dal contesto. PP1β partecipa alla regolazione della progressione del ciclo cellulare, della dinamica del citoscheletro e del controllo metabolico attraverso l’assemblaggio in oloenzimi con subunità di targeting e inibitorie che ne determinano la localizzazione subcellulare e la specificità di substrato. Nei sistemi murini, la fosforegolazione mediata da PP1β viene comunemente studiata in vie che governano l’organizzazione della cromatina, l’uscita dalla mitosi e la segnalazione responsiva allo stress. L’attività deregolata di PP1 e le alterazioni dei complessi contenenti PP1β sono frequentemente investigate per il loro ruolo nella proliferazione aberrante, nei processi neurobiologici e nei fenotipi cardiometabolici come correlati meccanicistici in modelli di malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP1β (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp1cb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp1cb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp1cb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP1β.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp1cb per lo studio della segnalazione di PP1β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ppp1cb critici per la funzione di PP1β
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp1cb per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PP1β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PP1β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp1cb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PP1β Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PP1β (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp1cb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp1cb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.