PP1α CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400318-ACT

PPP1CAは、タンパク質ホスファターゼ1アルファ（PP1α）の触媒サブユニットをコードしており、キナーゼによるシグナル伝達に拮抗してタンパク質リン酸化の恒常性を制御する主要なセリン／スレオニンホスファターゼです。PP1αは、多様な調節サブユニットと複合体（ホロ酵素）を形成し、それらが基質特異性や細胞内局在を規定することで、細胞周期の進行、染色体分配、グリコーゲン代謝、細胞骨格リモデリングに関与します。重要なシグナル分子や構造タンパク質のリン酸化状態を調節することにより、PPP1CAは増殖、DNA損傷応答、細胞ストレス適応を司る経路に影響を及ぼします。PP1αの活性や標的化の破綻は、複数の疾患状況で観察される異常なリン酸化シグナル状態と関連づけられており、経路解析やシステムレベル研究における機構的ノードとしての有用性を支持します。

PP1α CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP1CAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PP1α CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP1CA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP1CA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PP1αの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP1CA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPP1α依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP1CA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPP1α経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。