Polycystin-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400669

Descripción general

PKD2 codifica la policistina-2, un canal catiónico no selectivo permeable a Ca2+ de la familia TRP que se localiza en los cilios primarios, el retículo endoplásmico y la membrana plasmática para coordinar la mecanosensación y la señalización intracelular de calcio. La policistina-2 forma complejos funcionales con la policistina-1 y contribuye a vías dependientes de los cilios que regulan la polaridad epitelial, la morfogénesis tubular y el control del ciclo celular a través de efectores vinculados al Ca2+. La alteración de PKD2 perturba la homeostasis del calcio y los programas de señalización posteriores que influyen en la proliferación, la diferenciación y el transporte de fluidos en el epitelio renal y en otros epitelios. Las alteraciones genéticas de PKD2 se asocian estrechamente con la enfermedad renal poliquística autosómica dominante, lo que lo convierte en un nodo clave para investigar la señalización ciliar y los mecanismos relacionados con la formación de quistes en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Polycystin-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PKD2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PKD2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PKD2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Polycystin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PKD2 para la investigación de la señalización de Polycystin-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PKD2 críticos para la función de Polycystin-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PKD2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Polycystin-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Polycystin-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PKD2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Polycystin-2 (h) y el plásmido HDR Polycystin-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PKD2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PKD2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.