Polycystin-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400669-ACT

PKD2 は、多発性嚢胞腎関連タンパク質であるポリシスチン2をコードしている。ポリシスチン2は Ca2+ 透過性の非選択性陽イオンチャネルであり、一次繊毛、小胞体、ならびに形質膜に局在して、機械刺激感受性のカルシウムシグナル伝達の調節に関与する。ポリシスチン2はポリシスチン1と相互作用し、細胞内 Ca2+ 恒常性、細胞極性、上皮性管腔の形態形成の制御に寄与するとともに、増殖・分化プログラムに影響するシグナルを統合する。PKD2 依存性シグナルは cAMP や MAPK 関連応答と交差し、腎上皮における流体流（フロー）依存性シグナル伝達を調節する。PKD2 の遺伝学的破綻または発現調節異常は、常染色体優性多発性嚢胞腎および関連する嚢胞性表現型と強く関連しており、繊毛病（ciliopathy）の機序を研究するうえで重要な標的である。

Polycystin-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PKD2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Polycystin-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PKD2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPKD2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Polycystin-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPKD2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPolycystin-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPKD2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPolycystin-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。